Food News Latam - Nuevo programa de prevención de bacterias patógenas de larvas de Bombyx mori L

 

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Nuevo programa de prevención de bacterias patógenas de larvas de Bombyx mori L

Cuba Agricultura

La sericultura constituye el único campo de la agricultura que se dedica a la reproducción a gran escala del gusano de seda (Bombyx mori L.), lepidóptero con alto valor económico y domesticado para la producción de seda por más de 5000 años.

María del Carmen Pérez Hernández, del Instituto Nacional de Ciencias Agrícolas (INCA), Mayabeque (Cuba) analizó los los gusanos de seda (Bombyx mori L.) infectados naturalmente, los cuales presentaban síntomas de flacheria bacteriana. Los estudios morfológico, bioquímico y fisiológico de los aislados permitieron identificarlos como Enterobacter cloacae (SUR - 6), Serratia marcescens (DiP/2012) y Acinetobacter baumanii (Oct/Y), los cuales, en la literatura, son informados ampliamente como patógenos de insectos.

En Cuba, las investigaciones para la introducción de gusanos de seda comenzaron hace aproximadamente 10 años; sin embargo, no fue hasta el año 2011 cuando se dio inicio a su propagación masiva. El gusano de seda es afectado por múltiples tipos de patógenos, como son bacterias, protozoos, hongos y virus que causan enfermedades conocidas como flacheria, grasseeria, muscardina y pebrina. Sin embargo, la flacheria posee gran importancia, pues provoca pérdidas en las crías de hasta 70 %. La identificación y caracterización de nuevas especies patógenas es de sumo interés para la toma de medidas de control y saneamiento.

Los principales síntomas de la enfermedad están asociados a la pérdida de apetito en los individuos enfermos, la piel y el cuerpo se tornan fláccidos, y las larvas no tardan en morir, después de lo cual se ennegrecen, la piel se rompe y dejan escapar un líquido oscuro de olor desagradable.

Las bacterias poseen una función activa en el desarrollo de la enfermedad, ya que pueden actuar como patógenos individuales o en combinación con algún virus. Por tal razón son consideradas como causa probable de enfermedades epizoóticas, así la flacheria microbiana puede ser originada por un patógeno bacteriano o viral. La flacheria bacteriana se clasifica en tres grupos denominados septicemia, toxicosis bacteriana y enfermedades entéricas bacterianas.

En zonas de cría del gusano de seda en Cuba se observaron individuos con diferentes sintomatologías y comportamientos similares a los descritos para la presencia de patógenos. En la investigación se identificar los patógenos bacterianos asociados a la sintomatología observada en las crías de gusano de seda.

Los muestreos se realizaron en áreas de producción en la Habana, durante los meses de septiembre de 2012 a febrero de 2013. Se colectaron de 10 a 14 larvas de gusano de seda B. mori por cada una de las naves de producción que presentaron síntomas como: exudación, cambio de coloración a amarillo brillante, segmentos hinchados, necróticos, vómitos, excreta de heces fecales líquidas y semisólidas. Estas larvas, de diferentes edades y fechas de crianza, se alimentaron desde su eclosión con hojas de morera.

Las larvas se desinfestaron mediante inmersión en etanol (95%-10s), posteriormente en hipoclorito de sodio (5% - 1 min), y por último se lavaron de 4 a 5 veces con agua destilada. Se tomó una muestra del tracto digestivo, que se maceró y colocó en un tubo eppendorf con 200 µl de solución salina estéril (0,85%). A partir de la muestra, se prepararon diluciones seriadas hasta 10-7, que se sembraron en medio Columbia Agar Base (BIOCEN) suplementado con sangre de carnero (5%) y medio Agar MacConkey (BIOCEN), respectivamente. Las placas se sellaron con parafilm e incubaron a 37°C durante 24 horas.

Los aislamientos se incubaron en placas Petri con Agar Nutriente (37°C-24 h), en este período se observaron las características de las colonias como color, olor, transparencia, humedad, forma y tipo de borde. La morfología celular se determinó mediante tinción de Gram, se realizaron las pruebas de catalasa y oxidasa, así como crecimiento en medio Agar MacConkey (BIOCEN). El resto de los análisis bioquímicos y fisiológicos se llevaron a cabo siguiendo los procedimientos descritos en el Manual Bergey de Bacteriología Sistemática. Los resultados permitieron identificar el género bacteriano de los aislados, mediante la comparación con otras bacterias descritas en la literatura.

En el 85% de las muestras colectadas se obtuvieron aislamientos bacterianos, y de esta cifra se consideraron de mayor importancia, debido a la pureza y abundancia de su crecimiento, el 35% de los mismos. Los aislados SUR-6 y Oct/Y produjeron colonias de color blanco, bordes regulares y mucosas, mientras que el aislado DiP/2012 produjo colonias de color rojo en agar nutriente. Las cepas aisladas comparten características morfológicas y culturales con los géneros Enterobacter spp. (SUR-6), Serratia spp. (DiP/2012) y Acinetobacter spp. (Oct/Y).

Los resultados demostraron que el aislado SUR - 6 es una bacteria anaerobia facultativa, ya que puede utilizar y producir ácidos mediante la fermentación de azúcares, tales como: amigdalina, arabinosa, glucosa, melobiosa, manitol, sacarosa, sorbitol y ramnosa. Además, las pruebas de la beta-galactosidasa (ONPG), arginina deshidrolasa, ornitina descarboxilasa, producción de acetoína (Voges-Proskauer) y de utilización del citrato como fuente de carbono fueron positivas. La bacteria fue incapaz de fermentar el carbohidrato inositol, y fueron negativas también las pruebas de la lisina descarboxilasa, producción de H2S, ureasa, triptófano desaminasa, producción de indol y gelatina de Kohn. Con estos resultados se logró identificar este microorganismo como Enterobacter cloacae.

El aislamiento DiP/2012 representó una bacteria anaerobia facultativa, que puede utilizar y producir ácidos mediante la fermentación de la mayoría de los azúcares empleados, excepto melodiosa, arabinosa y ramnosa. Fueron positivas las pruebas de la beta-galactosidasa (ONPG), lisina descarboxilasa, ornitina descarboxilasa, gelatina de Kohn, ureasa y de utilización del citrato como fuente de carbono. Por otro lado, fueron negativas las pruebas de la arginina deshidrolasa, producción de H2S, producción de acetoína (Voges-Proskauer), triptófano desaminasa, producción de indol y gelatina de Kohn. Por tanto, con estos resultados se logró identificar este microorganismo como Serratia marcescens.

El aislado Oct/Y, es una bacteria aerobia, debido a su incapacidad de utilizar y producir ácidos mediante la fermentación de los azúcares, a excepción de los carbohidratos glucosa, melobiosa y arabinosa, los cuales son empleados por la misma como fuente de carbono; el resto de las pruebas realizadas, a excepción de la gelatina de Kohn, fueron negativas, lo que permitió identificarlo como Acinetobacter baumanii.

Los resultados de las pruebas morfológicas, bioquímicas y fisiológicas básicas posibilitaron identificar los aislados como Enterobacter cloacae (SUR - 6), Serratia marcescens (DiP/2012) y Acinetobacter baumanii (Oct/Y).

Actualmente se conocen una gran variedad de géneros bacterianos patógenos de B. mori, entre estos se destacan especies pertenecientes a los géneros Bacillus, Enterobacter, Serratia, Aeromonas , Streptococcus, Pseudomonas y Staphylococcus. En el caso de la septicemia, es causada comúnmente por Bacillus spp, Enterobacter spp., Serratia marceescens Bizio y Aeromonas spp., aunque se informó que la virulencia de estas bacterias difiere, por lo que los síntomas y el curso de la enfermedad no son uniformes.

Los resultados preliminares obtenidos en este trabajo permitieron establecer programas para la prevención y control de estos patógenos, a fin de evitar el incremento de las pérdidas en las producciones de la crianza afectada. Además, son la base para estudios futuros que permitirán conocer y profundizar en la patogenicidad de estas entidades bacterianas y sus efectos sinérgicos con otros patógenos, como el virus de la poliedrosis nuclear en B. mori (BmNPV).

Informó Carolina Brescia para FoodNewsLatam.com

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